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流式细胞术免疫学检测的影响与质量控制

2016-11-08 12:02  来源:彩天堂开户    打印 | 收藏 |
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流式细胞术免疫学检测的影响与质量控制:

流式细胞术在免疫学中有着广泛的应用,其免疫荧光染色的标本制备非常重要,常常由于标本的制备过程中出现人为非特异性荧光干扰(尤其在间接免疫荧光染色中)或细胞浓度低等检测结果。解决这些影响因素的方法如下。

(1)确保标本上机检测前的浓度为1×106/ml,细胞浓度过低直接影响检测结果。

(2)使用蛋白封闭剂,封闭非特异结合点,尤其在间接免疫荧光标记时必不可少。常用的蛋白封闭剂为0.5%牛血清白蛋白和1%胎牛血清。

(3)荧光抗体染色后充分洗涤,注意混匀和离心速度,减少重叠细胞和细胞碎片。

(4)设置对照样品,采用与抗体来源同型匹配的无关对照和荧光抗体的本底对照。

(5)判定结果时,应注意减去本底荧光,为使免疫荧光的定量分析更准确,应用计算机程序软件医学/教育/网编辑整理,用拟合曲线方法从实验组的,曲线峰值中减去对照组的,曲线峰值,可以得到更准确的免疫荧光定量结果。

(6)注意在冷环境下操作染色,或加入叠氮钠,保证细胞免疫荧光定量分析精确和稳定。

(7)标本保存,免疫荧光染色后,标本不固定可以在4摄氏度避光情况下保存24小时。时间更长则需要固定保存,常用的固定剂为1%-4%多聚甲醛缓冲液或4%甲醛缓冲液(pH 7.2),固定时间可达到2—3周。

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